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流式細胞術在過去30年里得到迅速發(fā)展,在免疫學、分子生物學、細菌學、病毒學、癌癥生物學和傳染病學等領域得到廣泛應用。比如,流式細胞術對研究免疫系統(tǒng)狀態(tài)及其對傳染病和癌癥的反應非常重要,它可以表征來自血液和骨髓的混合細胞群,以及由淋巴結、脾、粘膜組織、實體腫瘤等固體組織分解成的單個細胞。除了分析細胞外,流式細胞術另一個主要應用是對細胞進行分選,以滿足使用者進一步的分析需求。
本文將主要以細胞生物學、免疫學和分子生物學為例,介紹流式細胞術在實際中的應用。
細胞生物學與免疫學
免疫分型:
免疫分型在流式細胞術的應用中常見,它利用流式細胞術的能力同時分析混合細胞群的多個參數(shù)。免疫分型基本的形式就是使熒光偶聯(lián)抗體與細胞表面對應的抗原特異性結合,之后利用流式細胞儀,根據(jù)細胞表面的熒光對細胞做出分析。大多數(shù)抗原都有特定的分化亞群編號或者CD編號,對應的抗體用相同的方式命名。
大多數(shù)免疫細胞都有特定的CD標記,這些細胞標記稱為譜系標記,用于定義特定細胞群,以便在每個免疫分型實驗中進行額外分析。例如T細胞標記物(CD3, CD4, CD8), B細胞標記物(CD19, CD20),單核細胞標記物(CD14, CD11b)和NK細胞標記物(CD56, CD161)。
除了定義細胞群的譜系標記外,還使用其他標記來描述每個細胞群的特征。這些標記包括激活標記(CD69、CD25、CD62L)、記憶標記(CD45RO、CD27)、組織歸巢標記(α4/β7)和趨化因子受體標記(CCR7、CCR5、CXCR4、CCR6)等。通常,免疫分型還針對細胞內(nèi)標記物,如FoxP3(定義Treg細胞)、細胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2定義Th1細胞)、增殖標記物(Ki67、CFSE)和抗原特異性標記物等。
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